在现代生物科技领域，， ，，，， ，，CRISPR-Cas9手艺已经成为最受接待的基因编辑工具之一。。 。。。。
这种手艺可以用来研究基因功效，， ，，，， ，，疾病诊断和治疗等方面。。 。。。。其中最常用的应用就是构建基因敲除细胞模子。。 。。。。
本文将先容CRISPR手艺的基来源理和操作流程，， ，，，， ，，以资助您更好地相识和使用这种主要的基因编辑工具。。 。。。。
一、CRISPR手艺的基础原理
CRISPR（Clustered
Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）手艺最初是从大肠杆菌中发明的一种自然的细菌防御系统，， ，，，， ，，厥后被发明可以被用于基因编辑。。 。。。。
CRISPR-Cas9手艺基于一种叫做“RNA导向”的机制（guide RNA, gRNA），， ，，，， ，，这种机制可以让CRISPR-Cas9系统选择性地识别和切割DNA中的特定序列。。 。。。。这意味着我们可以使用CRISPR-Cas9来准确地编辑细胞中的基因序列，， ，，，， ，，包括基因敲除、插入、替换等等。。 。。。。
二、操作流程
CRISPR-Cas9手艺的操作流程分为四个主要办法：设计gRNA、构建质粒、转染细胞、判断细胞。。 。。。。
1.
设计gRNA：gRNA是由CRISPR-Cas9系统识别并切割目的DNA的要害部分。。 。。。。我们需要在目的基因中选择一个合适的靶点序列，， ，，，， ，，设计gRNA来指导Cas9卵白识别并切割该序列。。 。。。。
yh533388银河(中国区)有限公司官方网站开发的Quick-KO?基因敲除试剂盒凭证已知的人和小鼠编码基因，， ，，，， ，，接纳优化的预设计计划，， ，，，， ，，相较于古板计划具有更高的敲除效率。。 。。。。
2.
构建质粒：质粒是携带CRISPR-Cas9系统和gRNA的载体。。 。。。。在构建质粒时，， ，，，， ，，我们需要将Cas9基因和gRNA序列克隆到质粒中，， ，，，， ，，并确保它们可以在细胞中稳固表达。。 。。。。
yh533388银河(中国区)有限公司官方网站Quick-KO?基因敲除试剂盒中的Cas9质粒和gRNA质粒划分携带Blasticidin和Puromycin/mCherry筛选标记，， ，，，， ，，利便用户举行阳性细胞富集。。 。。。。
3.
转染细胞：将质粒转染到目的细胞中，， ，，，， ，，让它们表达CRISPR-Cas9系统并编辑目的基因。。 。。。。转染可以通过电穿孔或者化学转染的要领举行。。 。。。。
别的，， ，，，， ，，针对转染效率低的细胞，， ，，，， ，，也可以选择yh533388银河(中国区)有限公司官方网站慢病毒款的Quick-KO?基因敲除试剂盒。。 。。。。
4.判断细胞：最后一步是对乐成转染的细胞举行筛选，， ，，，， ，，通过PCR和测序的要领，， ，，，， ，，筛选出具有目的基因敲除的细胞。。 。。。。
三、目的细胞类型
CRISPR手艺可以用于多种细胞类型的编辑，， ，，，， ，，包括哺乳动物细胞、酵母菌、昆虫细胞和植物细胞等。。 。。。。
其中，， ，，，， ，，人类细胞是最常用的细胞模子之一，， ，，，， ，，可以用于疾病模子的构建、药物筛选和基础研究等方面。。 。。。。
yh533388银河(中国区)有限公司官方网站Quick-KO?基因敲除试剂盒主要针对人类细胞、小鼠细胞等哺乳动物细胞开发。。 。。。。
关于差别的目的细胞类型，， ，，，， ，，我们需要凭证细胞的特点和CRISPR手艺的限制来选择合适的CRISPR-Cas9系统和转染要领。。 。。。。
四、总结
基因敲除细胞模子的构建关于基础研究和药物研发等领域具有主要的意义。。 。。。。CRISPR手艺的泛起为基因编辑提供了一种高效、精准和经济的要领。。 。。。。在使用CRISPR-Cas9手艺举行基因敲除时，， ，，，， ，，我们需要选择合适的gRNA和基因递送要领，， ，，，， ，，最终获得目的基因敲除的细胞模子。。 。。。。
|
细胞 |
种属 |
组织/疾病 |
试剂盒计划 |
|
|
质粒型 |
慢病毒型 |
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|
22Rv1 |
Homo sapiens (Human) |
Prostate |
|
? |
|
293T |
Homo sapiens (Human) |
Kidney; Embryo |
? |
? |
|
4T1 |
Mus musculus (Mouse) |
Breast; Mammary gland |
|
? |
|
A2780 |
Homo sapiens (Human) |
Ovary |
|
? |
|
A-549 |
Homo sapiens (Human) |
Lung |
? |
? |
|
AGS |
Homo sapiens (Human) |
Stomach |
? |
|
|
AML12 |
Mus musculus (Mouse) |
Liver |
|
? |
|
BEAS-2B |
Homo sapiens (Human) |
Bronchus; epithelium |
|
? |
|
BON-1 |
Homo sapiens (Human) |
Pancreas |
? |
|
|
C3H10T1/2 |
Mus musculus (Mouse) |
Embryo |
|
? |
|
CFPAC-1 |
Homo sapiens (Human) |
Pancreas |
? |
? |
|
DU145 |
Homo sapiens (Human) |
Prostate |
|
? |
|
GIST-T1 |
Homo sapiens (Human) |
Gastrointestinal stromal tumor |
|
? |
|
HaCaT |
Homo sapiens (Human) |
Back; skin; epidermis |
|
? |
|
HCC1395 |
Homo sapiens (Human) |
Breast; Duct; Mammary gland |
? |
? |
|
Hela |
Homo sapiens (Human) |
Uterus; Cervix |
? |
? |
|
Hep3B |
Homo sapiens (Human) |
Pediatric hepatocellular carcinoma |
? |
? |
|
Hepa 1-6 |
Mus musculus (Mouse) |
Liver |
|
? |
|
HepG2 |
Homo sapiens (Human) |
Liver |
? |
? |
|
HL-60 |
Homo sapiens (Human) |
Peripheral blood |
? |
? |
|
HMC-1.1 |
Homo sapiens (Human) |
Mast cell leukemia |
|
? |
|
HT-29 |
Homo sapiens (Human) |
Colon adenocarcinoma |
? |
? |
|
Huh-7 |
Homo sapiens (Human) |
Liver, gallbladder |
|
? |
|
HUVEC |
Homo sapiens (Human) |
Umbilical vein |
|
? |
|
IMG |
Mus musculus (Mouse) |
Brain |
|
? |
|
IPEC-J2 |
Sus scrofa (Pig) |
Small intestine; jejunum |
|
? |
|
Jurkat |
Homo sapiens (Human) |
Peripheral blood |
? |
? |
|
K-562 |
Homo sapiens (Human) |
Bone; Marrow |
? |
? |
|
KM12-SM |
Homo sapiens (Human) |
Colon carcinoma |
|
? |
|
LoVo |
Homo sapiens (Human) |
Colon adenocarcinoma |
|
? |
|
MDA-MB-231 |
Homo sapiens (Human) |
Breast adenocarcinoma |
|
? |
|
MEG-01 |
Homo sapiens (Human) |
Bone marrow |
|
? |
|
mIMCD-3 |
Mus musculus (Mouse) |
Kidney; inner medullary collecting duct |
? |
? |
|
MTEC1 |
Mus musculus (Mouse) |
Thymus |
|
? |
|
MCF-7 |
Homo sapiens (Human) |
Invasive breast carcinoma |
|
? |
|
NIH 3T3 |
Mus musculus (Mouse) |
Whole embryo |
|
? |
|
PANC-1 |
Homo sapiens (Human) |
Pancreas; Duct |
|
? |
|
PC-3 |
Homo sapiens (Human) |
Prostate |
|
? |
|
QGP-1 |
Homo sapiens (Human) |
Pancreas; islets of Langerhans |
? |
? |
|
SGC-7901 |
Homo sapiens (Human) |
Uterus; cervix |
|
? |
|
SH-SY5Y |
Homo sapiens (Human) |
Neuroblastoma |
? |
? |
|
SK-HEP-1 |
Homo sapiens (Human) |
Liver; Ascites |
? |
? |
|
SNU-1 |
Homo sapiens (Human) |
Stomach |
? |
? |
|
SW480 |
Homo sapiens (Human) |
Large intestine; Colon |
|
? |
|
T-47D |
Homo sapiens (Human) |
Breast; Mammary gland |
|
? |
|
THP-1 |
Homo sapiens (Human) |
Peripheral blood |
|
? |
|
U-87MG |
Homo sapiens (Human) |
Brain |
|
? |
|
UM-UC-3 |
Homo sapiens (Human) |
Urinary bladder |
|
? |
|
WS1 |
Homo sapiens (Human) |
Skin |
? |
? |
|
CT26 |
Mus musculus (Mouse) |
Colon |
|
? |
