间充质干细胞属于成体干细胞，，，，，， ，可在体外通过差别的要领干预下下诱导分解为骨、软骨及其他结缔组织，，，，，， ，因其泉源普遍，，，，，， ，疏散无创伤，，，，，， ，较低的免疫原性、生长周期短等特点，，，，，， ，是组织工程种子细胞的主要泉源。。。。。。。干细胞的诱导分解一方面是干细胞判断的主要要领，，，，，， ，另一方面也是干细胞功效学研究的主要途径。。。。。。。接纳体外条件作育基诱导作育下，，，，，， ，人世充质干细胞应能够分解为成脂肪、骨、软骨细胞。。。。。。。成骨分解经茜素红染色法判断。。。。。。。
实验前准备：
试剂：PBS，，，，，， ，成骨诱导分解作育基，，，，，， ，茜素红
耗材：NEST细胞作育皿，，，，，， ，NEST通俗吸头，，，，，， ，NEST微量离心管
装备：CO2作育箱，，，，，， ，显微镜
一、接种骨髓间充质干细胞：
取对数生恒久的细胞，，，，，， ，凭证2×105cells/cm2的细胞密度接种至包被后的细胞作育皿中，，，，，， ，将接种好的细胞作育皿放到37℃，，，，，， ，5% CO2细胞作育箱作育，，，，，， ，按期视察细胞增殖状态，，，，，， ，当细胞融合度达60-70%时，，，，，， ，弃掉上清，，，，，， ，加入成骨诱导分解作育基。。。。。。。
二、细胞分解诱导：
每2-3天举行换液（按期视察是否有污染），，，，，， ，再放入37℃，，，，，， ，5% CO2细胞作育箱中作育约2-3周，，，，，， ，并注重视察细胞形态转变。。。。。。。凭证细胞钙盐结晶析出和钙质结节形成的情形，，，，，， ，决议终止细胞诱导的时间，，，，，， ，举行下一步染色判断。。。。。。。
三、细胞牢靠：
用吸头（确保吸收充分）吸去作育基使用适量1×PBS洗濯一次，，，，，， ，弃去后取适量4%中性甲醛溶液细胞作育皿底面，，，，，， ，室温固30-60min，，，，，， ，弃去牢靠液再使用1×PBS洗濯两次。。。。。。。
四、茜素红染色：
加入适量茜素红染液染3-5min，，，，，， ，吸去茜素红染液，，，，，， ，用1×PBS洗濯两次，，，，，， ，并加入适量1×PBS阻止细胞干燥。。。。。。。
五、诱导评估：
显微镜下视察成骨染色效果，，，，，， ，并举行图像收罗和诱导评估。。。。。。。诱导乐成时，，，，，， ，钙质结节会与茜素红染料团结后泛起红色或橘红色。。。。。。。
图c 间充质干细胞成骨诱导分解,茜素红染色显示钙结节..
